Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции (Методические указания МУК 4.2.3065-13)

Цель бактериологического исследования

Выявление возбудителя дифтерии с помощью минимального количества диагностических тестов.

Необходимые и специфичные тесты для получения достоверного ответа в максимально сжатые сроки

• Не менее трех суток – отрицательный ответ.
• Трех-четырех суток – ответ о выделении токсигенных коринебактерий дифтерии (возбудителя дифтерии).
• Четырех-пяти суток – ответ о выделении нетоксигенных коринебактерий дифтерии или других представителей этого рода.

Возбудитель дифтерии

Corynebacterium diphtheriae, продуцирующие дифтерийный токсин (экзотоксин).

Источники инфекции

Больной или бактерионоситель токсигенных C. diphtheriae.

Кровяные теллуритовые среды

• Лучшие селективные дифференциально-диагностические среды (КТА, Клауберг II).
• Обеспечивают рост колоний через 24 ч, что сокращает сроки выдачи окончательного бактериологического ответа на одни сутки.
• Просты в приготовлении: основа – коммерческий сухой питательный агар (СПА), добавки – кровь или любые гемолизированные кровяные добавки.

Окрашивание мазков

• Окрашивание по Лёффлеру (щелочной метиленовый синий) или другими синими красителями.
• Окраску по Граму не применяют, так как клетки грамположительных C. diphtheriae легко обесцвечиваются спиртом и могут выглядеть грамотрицательными (розовый оттенок).

Способы постановки пробы на токсигенность

• Модифицированная проба Элека с бумажными полосками, утвержденная в 1961 г.
• Проба Фельдмана Ю.Г. и соавторов с бумажными дисками, утвержденная в 1988 г.

Использование антитоксина

Только антитоксин – противодифтерийные антитоксические антитела, очищенные методом специфической сорбции, для избежания неспецифических линий преципитации микробного происхождения.

Обязательные биохимические тесты

• На цистиназу
• На уреазу
• На расщепление глюкозы, сахарозы и крахмала
• Тест на нитраты проводят только при положительной уреазной реакции.

Требования к взятию и транспортированию материала

• Использование коммерческих стерильных сухих ватных (или дакроновых) тампонов.
• Материал из ротоглотки и носа берут отдельными тампонами натощак или не ранее чем через 2 ч после еды, до применения полоскания или других видов лечения.
• Тампоны должны иметь форму «капли», а не «веретена».
• Взятие материала осуществляют при хорошем освещении, с использованием шпателя, не касаясь тампоном языка и внутренних поверхностей щек и зубов.
• Материал с ротоглотки берут с миндалин, дужек мягкого неба, небного язычка, при необходимости – с задней стенки глотки.
• При взятии материала из носа используют другой тампон, который вводят глубоко сначала в один, а потом в другой носовой ход.
• При дифтерии других локализаций (глаза, уши, кожа, раны, гениталии) берут материал из ротоглотки и носа.
• При прямой ларингоскопии материал собирают непосредственно из гортани.
• При взятии материала с пораженного участка кожи поверхность протирают стерильной марлевой салфеткой или тампоном, смоченными стерильным физиологическим раствором.

Транспортировка материала

• Доставить тампоны в лабораторию не позднее чем через 3 ч после взятия материала.
• В холодное время года для предотвращения замерзания материал доставляют в бактериологическую лабораторию в сумках-термосах.
• При невозможности доставки в установленные сроки материал из ротоглотки и носа засевают «площадкой» с последующим рассевом на одну чашку Петри с питательной средой, разделенной пополам («чашечный метод»).

Посев материала

• При редких локализациях посев материала из каждого пораженного участка осуществляют на отдельную чашку Петри с питательной средой.